Elution
L'élution consiste à dissocier les anticorps ou certains composants du complément fixés à la surface des globules rouges, afin de les récupérer dans une solution appelée éluat. Elle est principalement utilisée lorsque des immunoglobulines sont fixées aux hématies, notamment dans le cadre d'un test direct à l'antiglobuline (TDA/DAT) positif. L'éluat peut ensuite être étudié afin de rechercher et d'identifier les anticorps responsables de la sensibilisation des hématies.
Il existe différentes méthodes d'élution, notamment des méthodes utilisant la chaleur, des variations importantes de pH, des solutions acides ou certains agents chimiques. Le choix de la méthode dépend du contexte et des anticorps recherchés. Aucune technique n'est universelle : certaines méthodes peuvent altérer ou détruire certains antigènes érythrocytaires.
Après l'élution, l'éluat est généralement testé par des techniques d'agglutination ou d'antiglobuline afin de rechercher et, si possible, d'identifier la spécificité des anticorps récupérés.
L'élution peut notamment être utilisée dans l'exploration :
- d'une anémie hémolytique auto-immune (AHAI) ;
- d'une maladie hémolytique fœto-néonatale (MHNN) ;
- d'une réaction hémolytique transfusionnelle, notamment lorsqu'une allo-immunisation est suspectée ;
- de certaines situations complexes où l'interprétation de la sensibilisation des hématies nécessite une analyse complémentaire.
L'interprétation d'un éluat doit toujours être confrontée au résultat du TDA, au contexte clinique et aux autres résultats immuno-hématologiques.
Adsorption-Elution
L'adsorption-élution est une technique différente de l'élution directe des hématies du patient. Elle consiste d'abord à faire fixer, ou adsorber, un anticorps sur des globules rouges sélectionnés, puis à récupérer cet anticorps par une étape d'élution.
Cette technique peut être utilisée dans certaines situations complexes de groupage ABO, notamment lorsqu'une expression faible d'un antigène A ou B est suspectée. Elle peut également être utilisée dans certaines investigations sérologiques spécialisées.
Exploration d'une anomalie du groupage ABO
L'adsorption-élution peut contribuer à la mise en évidence de sous-groupes faibles A ou B, lorsque les antigènes sont exprimés en quantité insuffisante pour être correctement détectés par les techniques de groupage habituelles. Les sous-groupes faibles de l'antigène A comprennent notamment A3, Ax, Am, Ay et Ael.
Dans cette situation, des anticorps anti-A ou anti-B appropriés peuvent être mis en contact avec les hématies du patient afin d'adsorber les anticorps sur les antigènes présents à leur surface. Après lavage, les anticorps fixés sont élués puis testés sur des hématies de phénotype connu.
Une réaction positive de l'éluat apporte un argument en faveur de la présence d'un antigène faiblement exprimé. L'adsorption-élution constitue toutefois une technique complémentaire : l'interprétation d'une anomalie ABO peut nécessiter d'autres investigations sérologiques et, dans certaines situations, un génotypage ABO.
Absorption-élution dans l'étude des anticorps
Dans certaines situations complexes, notamment en présence de plusieurs anticorps, une adsorption peut être réalisée afin de retirer sélectivement un ou plusieurs anticorps du plasma ou du sérum du patient.
Des hématies possédant l'antigène correspondant à l'anticorps recherché sont mises en contact avec le plasma ou le sérum. L'anticorps correspondant peut alors se fixer sur ces hématies.
Après séparation et lavage des hématies, deux analyses peuvent être réalisées en parallèle :
- le plasma adsorbé est réétudié afin de rechercher les anticorps qui restent présents ;
- les hématies ayant fixé l'anticorps peuvent faire l'objet d'une élution, permettant d'étudier l'anticorps adsorbé.
Cette approche peut donc aider à confirmer une spécificité suspectée et à révéler d'autres anticorps qui étaient initialement masqués par un anticorps plus fortement réactif.
L'adsorption doit cependant être soigneusement contrôlée. Le choix des hématies adsorbantes est essentiel : une sélection inappropriée peut entraîner l'adsorption involontaire d'un autre anticorps et conduire à une interprétation erronée.
Dans les investigations spécialisées, les résultats doivent être confrontés au phénotype ou au génotype du patient, à l'historique transfusionnel et aux résultats de la RAI et de l'identification des anticorps.