Différentes techniques de RAI
La recherche d’anticorps irréguliers (RAI) peut être réalisée selon différentes techniques. L’interprétation d’une réaction positive ou négative dépend du principe et des performances de la méthode utilisée.
Technique en tube :
En technique en tube, le sérum ou le plasma du patient est incubé avec les hématies tests. Après incubation, la présence d’une agglutination est recherchée, éventuellement après ajout d’une antiglobuline humaine.
- Réaction positive : présence d’une agglutination visible des hématies.
- Réaction négative : absence d’agglutination et suspension homogène des hématies.
Technique en microplaque (technique magnétisée de Diagast) :
Dans les techniques en microplaque, notamment les systèmes utilisant la magnétisation des hématies, la réaction est réalisée dans des microcupules puis analysée automatiquement.
- Réaction positive : les hématies sensibilisées restent localisées au niveau des parois ou de la partie supérieure de la cupule selon le système utilisé.
- Réaction négative : les hématies forment un culot au fond de la cupule.
Technique en filtration :
Dans les techniques en gel ou en filtration, les hématies sont mises en contact avec le sérum ou le plasma du patient puis incubées et centrifugées.
- Réaction positive : les hématies agglutinées sont retenues dans la colonne.
- Réaction négative : les hématies non agglutinées migrent jusqu’au fond de la colonne.
Interprétation d'un dépistage
Le dépistage permet de déterminer si le sérum ou le plasma contient un ou plusieurs anticorps détectables dirigés contre des antigènes érythrocytaires.
Un dépistage positif doit être suivi d'une identification afin de déterminer la spécificité du ou des anticorps présents.
Un dépistage négatif ne permet pas d'affirmer l'absence absolue d'anticorps. Comme toute méthode biologique, la RAI possède une limite de détection. Celle-ci dépend notamment de la technique utilisée, de la concentration de l'anticorps et des caractéristiques de l'antigène.
Ainsi, un résultat négatif signifie uniquement qu'aucun anticorps détectable par la méthode utilisée n'a été mis en évidence.
Interprétation d'une identification
L’identification est réalisée lorsque le dépistage est positif. Elle consiste à comparer les réactions obtenues avec un panel d’hématies dont les profils antigéniques sont connus afin de déterminer la spécificité du ou des anticorps.
L’interprétation repose notamment sur plusieurs critères :
- la concordance entre les réactions observées et le profil antigénique des hématies du panel ;
- la présence de réactions positives avec des hématies exprimant l’antigène correspondant ;
- l’absence de réaction avec des hématies dépourvues de cet antigène ;
- l’utilisation d’un nombre suffisant d’hématies positives et négatives permettant d’étayer la spécificité suspectée ;
- la recherche d’éventuels anticorps supplémentaires masqués par le premier anticorps identifié.
Pour confirmer une spécificité, il est nécessaire d'obtenir des réactions concordantes avec plusieurs hématies antigène positif et antigène négatif. La règle classique des trois hématies positives et des trois hématies négatives constitue un principe d'interprétation couramment utilisé pour renforcer la probabilité statistique de l'identification.
Cependant, cette règle ne doit pas être considérée isolément : l'interprétation doit également tenir compte de la phase réactionnelle, du dosage éventuel de l'antigène, du phénotype du patient et du contexte clinique et transfusionnel.