Coombs Direct
Le test de coombs direct (TCD) ou test de coombs à l'antiglobuline (TDA) permet, grâce à un sérum antiglobuline humaine, de révéler la présence d'anticorps spécifique fixé sur l'antigène correspondant à la surface de l'hématie in vivo.
L'antiglobuline utilisé peut être de deux types : un anti-IgG ou un anti-Complément. L'antiglobuline Anti-IgG est composée d'immunoglobulines dirigées contre le fragment Fc de l'IgG. Celle-ci peut donc mettre en évidence des anticorps de type IgG fixés sur les globules rouges testés. L'antiglobuline de type anticomplément est essentiellement composée d'anti-C3d. Le C3d est présent en grande quantité et de façon relativement stable à la surface des globules rouges sensibilisés in vivo lorsque le complexe immun anticorps-antigène a conduit à l'activation du complément. Ainsi les anti-Lea (IgM), anti-Jka(IgG) et auto-anti-P (IgG) sont mis en évidence avec l'antiglobuline de type complément.
Le Test de Coombs Direct (TCD) est utilisé lors des Maladies Hémolytiques du Nouveau-Né (MHNN), d'une réaction transfusionnelle, lors d'Anémie Hémolytique Auto-Immune (AHAI) et lors d'anémie hémolytique d'origine médicamenteuse.
1. Différentes techniques :
Les laboratoires d'immuno-hématologie possèdent deux techniques afin de mettre en évidence la sensibilisation des globules rouges par les anticorps. Ces deux techniques ont des limites de détection différentes.
a. Technique en tube :
Cette technique n'est pas utilisée en technique de routine. Elle consiste à diluer les globules rouges du patient en eau physiologique et de mettre en contact les hématies diluées avec l'antiglobuline IgG et l'antiglobuline C3d. Afin de garantir les résultats des analyses, il est indispensable de réaliser un témoin réactif. Ce témoin réactif est composé des mêmes constituants que les autres réactifs (anti-IgG et anti-C3d) sans les anticorps spécifiques. Toute positivité de ce témoin ne permet pas la validation des analyses.
Voici les images que peuvent donner les résultats en tubes :
b. Technique par filtration :
Cette technique est à l'heure actuelle la plus utilisée, autant en technique manuelle, que par les automates. Cette technique necessite l'utilisation d'une cassette constituée d'une micro-cupule surmontant une colonne de filtration. Cette colonne de filtration contient des micro-billes et l'antiglobuline (soit IgG, soit C3d).
Après avoir mis les globules rouges du patient dans la cupule, la cassette est centrifugée. Lors de cette centrifugation, les globules rouges sont dirigés au fond de la colonne de filtration. Pendant cette phase de migration, l'antiglobuline va se fixer sur les hématies sensibilisées. Les hématies ayant fixé l'antiglobuline seront bloquées par les billes. Elles ne vont donc pas atteindre le fond de la colonne.
Les colonnes de filtration peuvent contenir une antiglobuline anti-IgG ou une antiglobuline anti-C3d. Ces cassettes possèdent également un témoin réactif. Ce témoin réactif doit être toujours négatif.
Voici les images que peuvent donner les résultats en filtration :
2. TCD IgG :
Le TCD ou Test de Coombs Direct de type IgG permet de mettre en évidence une sensibilisation (complexe immun anticorps-antigène) des globules rouges par un anticorps de classe IgG. La mise en évidence de ce complexe immun est très importante lors de la recherche d'une maladie hémolytique du Nouveau-né (MHNN) suite à une incompatibilité foeto-maternelle (IFM) et lors d'un problème lors de la transfusion sanguine de globules rouges.
Les anticorps IgG ont une importance particulière dans ces deux conflits immunologiques car leurs conséquences peuvent être graves. Dans les MHNN, le nouveau-né, en absence d'intervention rapide peut selon l'anticorps avoir des conséquences neurologiques graves. En transfusion, la mise en évidence d'anticorps fixés sur les globules rouges permet de confirmer un conflit immunologique.
Dans tous les cas où une sensibilisation à un anticorps IgG est mis en évidence, il faudra déterminer l'anticorps responsable de cette immunisation. Pour cela, il existe une technique au laboratoire d'analyses médicales : l'élution.
3. TCD C3d :
Le TCD ou Test de Coombs Direct de type C3d (anti-complément) permet de mettre en évidence une sensibilisation (complexe immun anticorps-antigène) des globules rouges par un anticorps de classe IgM ou IgG ayant activé le complément.
Les anticorps de type IgM ne présentent pas de danger en transfusion sanguine et ne passent pas la barrière du placenta lors des grossesses. Ils ne présentent que peu d'intérêt. Son interêt principal est de confirmer la présence d'un autoanticorps dans le sérum du patient lorsque celui-ci a été identifié lors de la recherche d'agglutinines irrégulières.
Les anticorps anti-IgG sont très dangereux en transfusion sanguine et dans les incompatibilités foeto-maternelles (IFM).
Il est important donc de savoir quel type d'anticorps (IgG ou IgM) est à l'origine de la sensibilisation des globules rouges. Pour déterminer cela, on réalise aussi le TCD en IgG. Si celui-ci est négatif, l'anticorps est de type IgM, sinon, c'est une IgG. Lorsque le Test de Coombs Direct est positif en IgG et en C3d, on dit que c'est un TCD mixte.
4. TCD Mixte :
Un Test de Coombs Directs (TCD) est mixte lorsqu'il y a une réaction positive avec les réactifs IgG et C3d et les globules rouges du patient. Cette double réactivité met en évidence la présence sur les antigènes des hématies (sensibilisation) d'anticorps de type IgG. Ces IgG ont la capacité d'activer le complément ce qui induit une réaction positive avec l'anti-complément. L'anticorps le plus fréquent qui donne ce type de résultat est l'anti-Jka.
Les anticorps IgG ont une importance particulière dans les conflits immunologiques car leurs conséquences peuvent être graves. Les maladies hémotytiques du nouveau-né (MHNN) sont dues à ce type d'anticorps. En transfusion, la mise en évidence d'anticorps fixés sur les globules rouges permet de confirmer un conflit immunologique.
Dans tous les cas où une sensibilisation à un anticorps IgG est mis en évidence, il faudra déterminer l'anticorps responsable de cette immunisation. Pour cela, il faudra réaliser une auto-adsoprtion ou une allo-adsorption.
Créé le 19 août 2011
Révisé le 27 décembre 2011
Rédigé par : stivionade
Sources : accédées
